ELISA實驗中檢測抗體的方法

1、雙抗原夾心法，原理和步驟與雙抗體夾心一樣的，用特異性抗原進行包被和制備酶結合物，以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。與間接法相比，具有靈敏度和特異性，但不是很常用，因為就目前的技術條件，想得到能用于ELISA檢測的純化抗原還是有一定的難度。臨床上常用于檢測HIV抗體初篩，TP抗體和抗HBS抗體等，這些檢測對特異性和靈敏度，準確性都要求特別高。

2、間接法，這個是檢測抗體的方法。操作步驟與雙抗體夾心法一樣，只是包被是純化的相應抗原而不是抗體了，加入樣品后洗滌，再加入的酶標記抗抗體，然后顯色，顏色深淺與樣品中待測抗體的濃度正相關。間接法也有一些自己的特點，一個就是酶標抗體可選擇性檢測抗體的亞型，可用于鑒別感染時期，如果是IGM，那么提示感染早期；另一個就是酶標抗體檢測抗體特異性不高，容易產生假陽性，可出現全板陽性，挺嚇人的。臨床上常用該方法檢測抗HCV抗體、抗HEV抗體、抗CMV抗體、抗HSV抗體、抗沙眼衣原體抗體等等。

3、競爭法，和檢測抗原設計的競爭法一致，臨床上用的不多，以下總結了一下兩個很具有代表性的：

（1）抗HBC抗體，檢測方法與抗原相同，包被抗原之后，分兩組，一組加入預先混勻的酶標抗體和待測樣品，一組只加入酶標抗體，兩組的顯色之差可代表待測抗體的相對含量，需注意的是待測抗體與酶標抗體是同一物質。

（2）抗HBe抗體檢測，方法與抗原競爭法設計稍有區別，包被的抗HBE抗體后，檢測也分兩組，一組先加入酶標HBeAGg再立即加入待測樣品，一組只加酶標HBEAG，兩組顯色之差代表待測抗體的相對含量，這種設計中包被抗體和待測抗體是同一物質。值得注意的是混合組不是事先混勻再加入，而是先加入待測抗體后再加入酶標抗原。

4、捕獲法，這種方法比較少用，由于具有識別抗體類型的優點，僅用于需要早期診斷的急性感染或者具有爆發性感染的疾病，如HAV-IgM、HBc-IgM、ToRCH等等。具體方法是先包被能識別抗體類別的抗體，洗滌后加樣品，再洗滌，加酶標記抗原，洗滌后顯色。
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